求助PCR所检测的基因水平以及蛋白水平的区别
1、蛋白稳定性：蛋白质的稳定性也可能导致qPCR和蛋白分析结果的差异。即使mRNA水平没有明显变化，蛋白质的稳定性变化可能会导致蛋白水平的波动。例如，蛋白质的蛋白酶降解、翻译后修饰或蛋白质的半衰期等因素都可能会对蛋白水平产生影响。实验技术的局限性：qPCR和蛋白检测方法都有其技术局限性。
2、PCR是检测基因水平得表达量；蛋白印迹是检测蛋白水平的表达。最终目的是检测蛋白水平的表达，有时候基因水平的表达不能反应蛋白水平的表达。
3、细胞水平：如果转进去的目的基因带有标记，例如荧光，那么用倒置荧光显微镜就可以看到，有荧光，则基因表达，当然这必须细胞本身没有荧光才行。蛋白水平：将样品收集，裂解，用蛋白免疫印记法（Western Blot）来检测，根据曝光条带判断有无目的蛋白的表达，从而证实基因的表达。
4、Western blot 检测的是蛋白水平，而RT-PCR检测的是mRNA，即基因水平的变化，一般来说，二者是平行关系，即基因水平的变化会引起蛋白水平相应的变化，但是从基因到蛋白也存在修饰等因素存在而出现基因水平升高而蛋白水平没有变化的情况，所以二者反应的是不同层次的变化。
5、磷酸化是翻译后修饰，在蛋白水平上的修饰，在基因水平，是否磷酸化是看不出来区别的。mRNA的量不仅不能够反应实时状态下蛋白的量，就更不用说区分蛋白是否磷酸化了。通常检测磷酸化的水平，WB能看一个大致相对水平，MS会用得比较多。
6、转录水平初步检测，就用半定量RT-PCR；精确的定量要做Real-Time RT-PCR 蛋白水平做Western。
什么是PCR扩增目的基因?
1、目的基因 PCR 分子生物学检测技术，通过扩增目的基因的特定区域来检测样本中是否存在该基因。其具体原理如下：PCR（聚合酶链式反应）是体外扩增 DNA 片段的技术，利用特定的引物（primer）和酶，在高温和低温循环条件下使 DNA 片段逐步扩增。
2、PCR是根据建基互补的原则来进行DNA扩增的。用PCR来获得目的基因，是依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物（即上游引物，下游引物）。通过PCR的变性--退火--延伸三个基本反应，在引物区间内的基因就能大量被复制，达到钓取基因的目的。
3、聚合酶扩展。据查询，pcr技术扩增目的基因的原因在多种酶的作用下可以变性解旋成单链，在DNA聚合酶的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。
PCR中的目的基因是DNA还是RNA
1、是DNA。PCR引物又称为寡核苷酸引物，也就是RNA，是由人工合成的，分为两种，引物1和引物2。
2、PCR的模板可以是DNA，也可以是RNA。
3、是的。一般的PCR是用DNA做模板，扩增的是模板DNA或模板上的特定DNA片段。如果是反转录PCR（RT-PCR），模板就是RNA，扩增的是转录该RNA的基因DNA片段。至于何时用DNA，何时用RNA，要看你的实验目的。
4、DNA。PCR，即聚合酶链式反应，是一种分子生物学技术，通过特定的引物和DNA聚合酶，将特定的DNA片段在体外进行快速、特异的扩增，在扩增的过程中，引物起到了至关重要的作用，引物是人工合成的单链DNA分子，设计用来特异性地结合到目标DNA序列的两侧。
PCR技术中为什么3次循环才能得到目的基因
1、原因如下：第一个循环扩增出来的新片段很长很长。第二个循环以新的长片段为模板进行，但新片段的一端是引物开头的，所以第二个循环得到的片段就是我们需要的长度，但只是一条链，所以还不能分离出目的基因。
2、原因如下：一般需要获得的基因是有一定长度的，而模板长度很长。设计的引物决定了扩增产物的长度。第一个循环，引物与模板互补，此时变成两个模板，但因为模板很长，没有什么终止扩增，所以第一个循环扩增出来的新片段很长很长。
3、PCR扩增就是循环步骤，一般进行20-40个循环。每次循环*2（不考虑扩增效率）。你说的三次是什么意思？最多这样（自己看图理解）：至此，就是三个循环，卡住了一个大小区间（比如100bp），接下来 以此不断重复。
4、每一次PCR循环过后，你的目标基因都会增加一倍，但是一般要做到30-40个循环后才开始检测，因为你里边的材料耗尽了，目标基因扩增接近最大值，检测出来才有效果。好像没有人只做几个循环就结束的吧。。
PCR怎么获得目的基因
1、PCR是根据建基互补的原则来进行DNA扩增的。用PCR来获得目的基因，是依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物（即上游引物，下游引物）。通过PCR的变性--退火--延伸三个基本反应，在引物区间内的基因就能大量被复制，达到钓取基因的目的。
2、PCR是用来将目的基因扩增的方法，要获得目的基因要用别的方法。
3、获得目的基因的方法：构建基因文库 提取总dna。用限制性内切酶将总dna切成小片段，连到质粒或噬菌体载体上，把这些质粒转化到细菌，随着细菌繁殖而复制，这个过程又称为基因克隆（gene clone）将总dna包含的基因组各片段分别克隆在质粒或噬菌体载体上，便构成了该生物的基因文库（gene library）。
4、利用PCR技术获得基因的话有很多种：1）没有内含子的基因，直接可以设计引物从DNA中扩增出来 2）有内含子的，可以利用RNA反转录得到的cDNA为模板，扩增获得 3）基因组测序没有完成的物种，可以利用RACE的方法获得相应的基因 除此之外，还有很多方法。
pcr扩增目的基因的临床意义
1、在临床上多用于感染性疾病，肿瘤和遗传病的检测和诊断。PCR技术能在短时间内大量扩增目的基因DNA片段，且全部操作已实现自动化。大量扩增目标基因片段，用于基因工程或检测。
2、PCR最有价值的应用领域就是对感染疾病的诊断。理论上，只要样本有一个病原体存在，PCR就可以检测到。在实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，加入设计引物，DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。
3、PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。