如何通过qpcr看一个基因的表达丰度
1、由于real-time qPCR灵敏度高，所以每个样品至少要做3个平行孔，以防在后面的数据分析中，由于Ct相差较多或者SD太大，无法进行统计分析。通常来讲，反应体系的引 物终浓度为100-400mM；模板如果是总RNA一般是10ng-500，如果cDNA，通常情况下是1ul或者1ul的10倍稀释液，要根据目的基因 的表达丰度进行调整。
2、扩增过程：使用qPCR仪对PCR反应进行数轮扩增，扩增曲线中根据扩增产物的拷贝数与相关基因的相对丰度呈正比关系，多次扩增后产生的曲线在最后一个扩增周期称为CT值。
3、相同表达丰度的转录本，往往会由于其基因长度上的差异，导致测序获得的Read（Fregment）数不同。总的来说，越长的转录本，测得的Read（Fregment）数越多。 （2）由测序文库的不同大小而引来的差异。即同一个转录本，其测序深度越深，通过测序获得的Read（Fregment）数就越多。
4、qPCRMasterMix都是2×的浓缩液，只需要加入模板和引物就可以。通常来讲，反应体系的引物终浓度为100-400mM；模板如果是总RNA一般是10ng-500，如果cDNA，通常情况下是1l或者1l的10倍稀释液，要根据目的基因的表达丰度进行调整。
5、通常来讲，10微升反应体系的10nM引物浓度加0.2微升左右就可以模板如果是总RNA一般是10ng-500ng，如果是cDNA，通常情况下是1微升或者1微升的10倍稀释液。要根据目的基因的表达丰度进行调整。
6、常说的qpcr，qrt-pcr，都是通过实时（real time）的方法，测定样品中某个模版的起始量ct值 但是呢，由于之前rna提取、反转等步骤，各个步骤存在不同的效率，ct值并无法真实反应样品中模版的绝对量，因此，需要一个内参来做为参考。
如何判断基因诊断准确率?用DNA标准品可以吗?
同时需明确，无创产前基因检测属于筛查范畴，而产前诊断属于诊断范畴，虽然拥有和产前诊断相似的准确度，但是仍然无法替代产前诊断。
基因测序技术与目前市场上存在的基因检测技术的对比：DNA 测序技术的优势：DNA 测序技术是人类探知大自然和人类自身生命奥秘的基本武器，所有生物基因组序列的数据，都来自于 DNA 测序。
如果有改变，找出可引起疾病的变异基因，从而判断被检测者是否患病，例如一些遗传病。“基因检测的确具有很高的医学价值。”北京吉因加科技有限公司总裁杨玲认为，许多遗传病的致病基因都非常明确，通过基因检测，能准确发现和确诊遗传病。
利用DNA进行亲子鉴定，只要作十几至几十个DNA位点作检测，如果全部一样，就可以确定亲子关系，如果有3个以上的位点不同，则可排除亲子关系，有一两个位点不同，则应考虑基因突变的可能，加做一些位点的检测进行辨别。DNA亲子鉴定，否定亲子关系的准确率几近100%，肯定亲子关系的准确率可达到999%。
基因检测是通过血液、唾液或细胞对DNA进行检测的技术。基因检测能够预测一些大病及癌症，对于胎儿还可以检测出是否有遗传病和基因突变疾病。基因检测的应用范围：计算单基因遗传病率，通过基因检测，可以准确的判断出孩子的遗传病率。
在dna水平上分析基因一级结构,拷贝数变化及在染色体上位置可以采用哪些...
遗传标记是指在人群中表现出多态现象的DNA序列，可追踪染色体、染色体某一节段或某个基因座在家系中传递的任何一种遗传特性。它存在于每一个人，但大小和序列有差别，具有可遗传性和可识别性。目前采用第二代遗传标记，即重复序列多态性，特别是短串联重复序列，又称微卫星标记。
DNA测序法：这种方法是通过读取DNA序列信息来进行鉴定。一般采用第二代测序技术，对目标DNA片段进行大规模平行测序，然后对比分析数据库中的序列信息，以确认身份。DNA指纹法：该方法主要用于个体识别，通过检测特定基因座上的等位基因，生成独特的DNA指纹图谱，类似于指纹的识别原理，达到鉴定目的。
基因的拷贝数变化（CNV）可以影响产物的量，从而影响性状。而且拷贝多了对进化有利，人基因组里有很多重要的基因都是多拷贝的，比如MHC分子、TCR、抗体的基因等等。方法主要是测序，最近开始利用荧光定量PCR来做。
螺旋-转折-螺旋（helix-turn-helix，HTH）结构（这个结构是要去结合DNA的） 这一类蛋白质分子中有至少两个α螺旋，中间由短侧链氨基酸残基形成转折，近羧基端的α螺旋中氨基酸残基的替换会影响该蛋白在DNA双螺旋大沟中的结合。
CGH是一种将消减杂交和FISH相结合，用于检测两个（或多个）基因组间相对DNA拷贝数变化（如扩增、增益（gains）、复制和丢失等），并将这些异常定位在染色体上，因此又称DNA拷贝数核型（DNA copy number karyotype）技术。
就是说先定量一个ng级以上的标准模板，可以用紫外分光光度计或是nanodrop等仪器能够检测出的，然后梯度稀释，这样先制作成一个标准的曲线）这样可以根据RT-PCR的扩增Ct值代入到标准曲线里去求出拷贝数，当然模板要全部包含在基因组内。不知道我说的对不对，也就是你所说的实际上就是检测模板的浓度。
实时荧光定量PCR可以用来精确测定DNA浓度吗
实时荧光定量PCR可以用来精确测定DNA浓度吗 实时荧光定量PCR不是用来测浓度的，可以用来做基因的拷贝数。但是如果你的产物单一，有相应的标准品，也是可以测浓度的，浓度的准确性和你的标准曲线相关。
实时荧光定量PCR是目前确定样品中DNA（或cDNA）拷贝数最敏感、最准确的方法。
为什么荧光定量pcr可以准确定量 实时定量的引物设计要求比较高，可以按普通引物设计的方法来做，但是设计时要注意扩增的片段不能太大，最好在250bp-100bp之间。
实时荧光定量PCR不是用来测浓度的，可以用来做基因的拷贝数。但是如果你的产物单一，有相应的标准品，也是可以测浓度的，浓度的准确性和你的标准曲线相关。
用于临床分子诊断的材料有哪些及取材时的注意事项?
⑴粪便检查 ①常规检查：粪便外观多为黏液脓血便，无粪质。镜检有大量脓细胞或白细胞及分散的红细胞，如见巨噬细胞有助于诊断。②病原学检查：确诊依赖于粪便培养出痢疾杆菌，并同时进行药物敏感试验以指导临床合理选用抗菌药物。
宫颈活检可以明确诊断，确定治疗方法。宫颈活检是确诊宫颈癌最可靠的依据。无论是早期或晚期宫颈癌，都必须通过本项检查以确定癌肿的病理类型和细胞分化程度。宫颈活检方法很简单。在消毒外阴、阴道、宫颈后，用一把特制的活检钳，根据病变部位和要求。
标本的固定 组织标本及时的取材和固定是做好免疫组化染色的关键第一步，是有效防止组织自溶坏死，抗原丢失的开始。离体组织应尽快的进行取材固定，最好20分钟内，因为有些抗原若固定不及时可能就检测不到了。
